Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中随之扩展

从第一次显现肝细胞自身抗体到显现1型白血病针灸患者的困难重重率在孩童以前就有很好的说明了，多个肝细胞自身抗体中性的孩童中都有70%在肝脏转化后10年内身患白血病，而随访15年的孩童这一比率增高到84%。比起之下，占针灸1型白血病一半以上的型1型白血病的发作机制还无法得到充分的研究工作。

越来越多的人开始使用分段系统来定义1型白血病的困难重重：个体在显现多种肝细胞自身抗体时转到第1收尾，显现血糖所致时转到第2收尾，显现患者时转到第3收尾。一些多发肝细胞自身抗体中性的个体，在1期和2期，困难重重较更慢，并转型为发作的1型白血病。我们先前说明了了一两组在首次筛选到多种肝细胞自身抗体样品后至更少10年无白血病的极更慢困难重重者，这两组病患人数更少，但基本特征非常指明。随后，我们断定肝细胞自身淋巴细胞酪氨酸CD8+T两条路线粒体加成在困难重重快速的病患中都基本不存在，但在现阶段发作和起因于的白血病病患中都很容易筛选到。这可能证明，与困难重重病患比起，这些病患自身抗体的适度增强。

以前研究工作证明，尽管适度性T两条路线粒体(Treg)数目显现所致，但白血病病患存在一些功能性缺陷，其中都之外对IL-2的加成技能降低。此外，白血病病患中都的现象CD4+T两条路线粒体可能对适度更为重要抵抗性，表现为现象T两条路线粒体的减缓向西移动，自然显现出的Treg和体外显现出的抑止Treg，以及淋巴细胞个人经历的CD4+T两条路线粒体中都IL-2加成向西移动。本研究工作的目地是说明了了CD4+适度性T两条路线粒体(Treg)在一小群极快速困难重重者中都的基本特征，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的中轴研究工作，在21岁以下确诊的病患亲友中都检查1型白血病的危险状况。我们先前说明了了曾一度快速困难重重者的基本特征，他们维持多重肝细胞自身抗体中性最更少10年，但无法显现白血病的针灸患者，更慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续维持无白血病并想提供大量血液样品的快速困难重重者纳入T和B两条路线粒体功能性统计分析。在迄今的研究工作中都，8名更慢困难重重者(SP两组)，中都位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肝细胞自身抗体中性。所有的两组织者都处于1型白血病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗体对某些淋巴细胞的中性加成，然而，一名病患已经处于2期至更少6年，但无法显现针灸患者，一名病患被确诊为白血病，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该遗传物质顺利完成了直接评估。剥离外周血单个加成器两条路线粒体(PBMCs)，采用多参数流式两条路线粒体术和T两条路线粒体减缓试验评估遗传物质中都Treg的频率、遗传基因和功能性。使用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和复归)顺利完成无督导聚类统计分析，评估Treg遗传基因。

结果：与保健遗传物质比起，来自更慢困难重重体的清醒CD4+T两条路线粒体的督导聚类辨识，介导的清醒CD4+ Treg频率增高，与糖皮质激素抑止的TNFR就其蛋白(GITR)理解增高有关。一名HbA1c升高的病患与困难重重快速者和给定的对照两组比起，Treg谱有所不同。功能性统计分析证明，与保健遗传物质比起，来自快速困难重重体的Treg介导的CD4+现象T两条路线粒体减缓明显损坏。表现为对现象CD4+T两条路线粒体CD25和CD134理解的减缓增高。

平面图1 深入的遗传基因统计分析辨识，CD4+Treg亚型在更慢困难重重链表中都增高。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的来生CD4+CD45RA -两条路线粒体上。根据上面物理解鉴别出10个元簇:清醒T两条路线粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T两条路线粒体;HLA-DR + GITR +清醒T两条路线粒体;内加成器Treg_1;内加成器Treg_2;内加成器Treg_3;和内加成器Treg_4。(a)使用9个不同Treg上面降解的10个元簇的MST。每个路由器代表者一个战略性(100个战略性)，很大的元战略性(10个元战略性)在路由器两组周围上色。每个路由器中都的碗平面图回应单个上面的理解级别。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识整体上面理解。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)降解平面图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较核素为每个metacluster装有两条路线平面图(核素> 0.05%)确定为HD和SP两组:内加成器Treg_2 (e),内加成器Treg_3 (f),内加成器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T两条路线粒体(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T两条路线粒体(l)。蓝色左上角代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩筛选。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 使用CITRUS的相吻合确认，Treg频率的增高是困难重重快速的标志。分级门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP两组织者和给定的HD两组织者在CD4+CD45RA−T两条路线粒体上的歧异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表者性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利完成剥离，虚拟FlowSOM族裔。(b) HD(白斑)和SP(蓝点)两组以及遗传物质SP 606(蓝色)中都CD25+ cd127的频率综合平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装有两条路线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内加成器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内加成器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内加成器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内加成器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解风速后处理，左上角突出的簇被辨认为SP和HD链表中间的不同。(j)装有两条路线平面图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比较核素(比率)。(k)直方平面图辨识每个簇的遗传基因(蓝色)和Treg上面相比较理解与背景理解(紫色);上列，内加成器Treg_3;下面几天后，内加成器Treg_4。背景与所有其他簇中都上面的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩筛选

平面图3 与保健献血者比起，困难重重快速者清醒treg的GITR增高。每个清醒CD4+T两条路线粒体元簇(清醒T两条路线粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T两条路线粒体;HLA-DR + GITR +清醒T两条路线粒体;内加成器Treg_2;内加成器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)筛选每个理解上面的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的理解热平面图(sp606不之外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(蓝灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR理解串联，辨识直方平面图(c)和综合平面图(d)。Wilcoxon类推符号秩和筛选，p< 0.07(蓝色)所有遗传物质之外，p< 0.05(紫色)遗传物质SP 606和给定的HD不之外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR理解，从分级门控，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(蓝色)串联，辨识直方平面图(e)和综合平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩筛选

平面图4 来自快速困难重重的CD4+ treg两条路线粒体依靠现象CD4+T两条路线粒体的技能降低。SP两组用紫色的两条路线和左上角回应，HD两组用红色的两条路线和左上角回应，蓝色的两条路线/左上角回应遗传物质sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒体顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上面为CFSE, Treg按观察的比率加成物。用抗CD3 /28微珠来生化两条路线粒体，培养3在此之后顺利完成流式两条路线粒体术筛选。(a-d)与CD4+反之亦然者相比较应的treg培养(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培养。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE减缓%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓%-。使用中性对照(介导的响应两条路线粒体不含treg)计算减缓%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T两条路线粒体对快速困难重重的T两条路线粒体来生化的减缓更脆弱。SP两组用紫色的两条路线和左上角回应，HD两组用红色的两条路线和左上角回应，蓝色的两条路线/左上角回应遗传物质sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒体顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上面，treg按观察的比率加成物。用抗CD3 /28微珠来生化两条路线粒体，培养3在此之后顺利完成流式两条路线粒体术(CD25反染)和两条路线粒体因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培养。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中都的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速困难重重子的来生化清醒CD4+Treg在GITR理解中都得到了扩展和丰富多彩，强调了实质性研究工作Treg在1型白血病风险个体中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28